卡斯蒂利亚的伊莎贝拉（1451年4月22日-1504年11月26日）是卡斯蒂利亚和莱昂的女王。她是卡斯蒂利亚的约翰二世和他的第二任妻子葡萄牙的伊莎贝尔的女儿。
她的哥哥恩里克四世是卡斯蒂利亚的国王，他希望她能把自己嫁出去。她想嫁给葡萄牙的人，以结成政治盟友。她于1469年与阿拉贡的斐迪南二世秘密结婚，并与他生了五个孩子。最年轻的是阿拉贡的凯瑟琳，她在1509年嫁给了英格兰的亨利八世。伊莎贝拉是西班牙卡洛斯一世（查理五世，神圣罗马帝国皇帝）的祖母。
伊莎贝拉的哥哥去世后，她本应成为新的女王。她哥哥恩里克斯的女儿胡安娜却想成为女王。经过一场战争，伊莎贝拉成为女王。同时，伊莎贝拉的丈夫斐迪南成为阿拉贡国王。他们将卡斯蒂利亚和阿拉贡的土地合并为今天的西班牙。伊莎贝拉帮助支付了克里斯托弗-哥伦布寻找美洲的四次旅行。在他们那个时代，美洲被称为 "新世界"。她在1492年签署了一项休战协议，使西班牙成为一个基督教国家。她死后，她的女儿卡斯蒂利亚的乔安娜成为女王。
